犬瘟pcr怎么测试?

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pcr是分子生物学技术的一种,全称为多聚酶链式反应,也可称为DNA复制,是特异扩增某个目的基因片段的分子生物学技术。pcr技术主要是针对目的基因片段进行放大,使其生物量足够多可以进行后续的研究,例如分析目的基因的结构,功能,进行基因定位,找出基因突变引发的疾病等。

在临床诊断中,一般用pcr对感染犬瘟的犬的咽部,唾液,乳房,脑组织等进行采样,通过这些样品能检测到相应病毒的DNA。pcr检测犬瘟病毒还非常的灵敏,特别适用于那些感染强度低的病样检测和早期诊断。被证实感染了犬瘟的犬,必须迅速隔离,对环境,设施进行消毒处理,防止病毒扩散。而且犬的粪便,尿,唾液,鼻涎等都需要消毒处理,以免传染给其他健康犬。

pcr技术之所以能用于检测病毒,是由于细胞内含有以dna为模板进行g+c脱氧核糖核苷酸扩增的反转录酶,以dna为模板通过这种酶的作用进行g+c分子克隆扩增反应

其特点为:

1.需要至少200-500个靶分子(核酸序列)序列信息就可以进行扩增,不需知道突变的位点和方向。

2.pcr反应的特异性来自寡聚核苷酸引物,而引物设计的好坏,决定了pcr反应的特异性。

3.pcr反应产物的检测方法很多,常用的有:琼脂糖凝胶电泳,pc膜分子杂交及核酸蛋白质分析仪等。

4.pcr最大的缺点是引物退火温度不易掌握,如果退火温度较低则非特异的扩增会妨碍目的基因的扩增。如果退火温度太高,则引物不能与靶基因相结合。

在临床病毒检查中,常用的方法有:

1.病毒分离实验:从病犬的急性期痘组织,肺脏脂肪组织,膀胱,脾脏,血清,脑脊髓液等分离感染病毒,该法可靠,有诊断意义,为公认的“金标准”,但实验条件要求较高。

2.动物补充实验:将病犬的病毒分离物接种健康犬,观察2—4周,一旦出现症状即可确诊。

3.抗原检测实验:用免疫荧光技术,酶联免疫吸附试验检测样品内的病毒抗原。该法优点是特异高,可避免其他血清型的干扰,适用于流行病学普查。缺点是不能鉴别病毒型别,且敏感性低,影响检验效果。

4.血清学实验:酶联免疫吸附试验,间接免疫荧光实验,免疫印迹试验等。灵敏度偏低,需用大量病例检验实验,主要用于流行病学调查。

5.分子生物学检查:核酸蛋白质分析仪,聚合酶链反应等。此方法具有特异高,敏感性强,结果可靠,操作简便,费用较少,对临床流行病学初步筛查及急诊检验,均具有广泛的意义。

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